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呋喃西林檢測試劑盒

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主要規(guī)格：
wi73897

用　　途：

一、概要硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長的添加劑。但在長時間的實驗研究過程中發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實驗動物發(fā)生癌變和基因突變，正因為如此才導(dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用用來檢測呋喃西林代謝物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù)，采用SEM衍生物的特異性抗體，具有很高的精確度和靈敏度，較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測時間，檢測樣品量大等特點在檢測中很好的表現(xiàn)出來。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。二、試驗原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被呋喃西林代謝物抗原，樣品殘留的呋喃西林代謝物和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物呋喃西林代謝物呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中呋喃西林代謝物的含量。三、適用范圍可定性、定量檢測動物組織（雞、豬），蜂蜜樣品中的呋喃西林代謝物的殘留量。四、交叉反應(yīng)率呋喃西林代謝物…………………………………… 100% 呋喃它酮代謝物…………………………………小于 0.1% 呋喃妥因代謝物 …………………………………小于 0.1% 呋喃唑酮代謝物………………………………………小于0.1% 五、使用單位需自備的設(shè)備及試劑設(shè)備： ┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm ┅┅振蕩器 ┅┅渦旋儀 ┅┅離心機 ┅┅旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮氣吹干裝置 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅聚苯乙烯離心管：10ml、50ml ┅┅微量移液器：單道 20ml～200ml、200ml～1000ml 多道 250ml 試劑： ┅┅乙酸乙酯(分析純) ┅┅正己烷(分析純) ┅┅甲醇(分析純) ┅┅濃鹽酸 ┅┅氫氧化鈉(分析純) ┅┅去離子水六、提供的材料與試劑組份名稱 96T裝量 48T裝量備注酶標(biāo)板 96T 48T 其它各規(guī)格裝量按比例增加或減少，具體裝量以實物為準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)品×6瓶* 1ml/瓶 0.5ml/瓶高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb 1ml/瓶 0.5ml/瓶呋喃西林代謝物抗試劑 6ml 3ml 呋喃西林代謝物酶標(biāo)物 6ml 3ml 底物液A液 6ml 3ml 底物液B液 6ml 3ml 終止液 6ml 3ml 濃縮洗滌液(10×) 40ml 20ml 呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×) 40ml 20ml 10×衍生化試劑 1ml/瓶 0.5ml/瓶 *注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb 七、溶液的配制配液1: 樣品稀釋液用去離子水將呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×)按1:1體積比進(jìn)行稀釋，即：1份呋喃西林代謝物濃縮樣品稀釋液(2×)+1份去離子水；用于提取樣品的稀釋，樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液2: 洗滌工作液用去離子水將濃縮洗滌液(10×)按1:9體積比進(jìn)行稀釋，即：1份濃縮洗滌液(10×)+9份去離子水；用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月。配液3: 1×衍生化試劑將10×衍生化試劑用甲醇按1:9體積比進(jìn)行稀釋，即：1份10×衍生化試劑+9份甲醇，現(xiàn)配現(xiàn)用。配液4: 0.1M鹽酸溶液量取860ml/濃鹽酸加入到盛有去離子水的容器中定容至100ml。配液5: 0.1M 氫氧化鈉溶液稱取0.4g氫氧化鈉加去離子水溶解定容至100ml。八、樣品前處理步驟樣品處理前須知：（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果。（c）未處理的樣品冷凍保存。（d）處理后的樣品可在2-8℃避光保存24h。肌肉、肝臟、蜂蜜組織前處理方法 ┅┅用均質(zhì)器均質(zhì)樣品； ┅┅稱取1.0±0.05g均質(zhì)后的樣品, 分別加入4ml 0.1M 鹽酸溶液和100ml 1×衍生化試劑，用振蕩器充分振蕩2min； ┅┅在37 oC過夜孵育（大約16h）； ┅┅分別加入4ml 0.1M 氫氧化鈉溶液和10ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s； ┅┅3000g以上，室溫（20～25℃/68-77℉）離心5min； ┅┅取5ml乙酸乙酯相于50～60℃氮氣流下吹干； ┅┅加入1ml樣品稀釋液和1ml正己烷，用渦旋儀渦動30s ，充分混勻； ┅┅3000g以上，室溫（20～25℃/68-77℉）離心5min； ┅┅除去上層有機相，取下層水相50µl用于分析。九、檢測步驟測定前應(yīng)須知： 1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。 2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。 4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。操作步驟： 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。 4、編號：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。 5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50ml/孔到對應(yīng)的微孔中，再加入呋喃西林代謝物酶標(biāo)物50ml/孔，再加入呋喃西林代謝物抗試劑50ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250ml/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。 7、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。 8、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。十、結(jié)果判定結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，而定量判定用第2種方法。注意樣品吸光值與其所含呋喃西林代謝物成負(fù)相關(guān)。 1、用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.569，樣品2的吸光度值為1.725，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.523；0.05ppb為2.217；0.15ppb為1.566；0.45ppb為0.842；1.35ppb為0.387；4.05ppb為0.145。則樣品1的濃度范圍是0.45ppb～1.35ppb；樣品2的濃度范圍是0.05ppb～0.15ppb，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中呋喃西林代謝物的濃度范圍。 2、定量分析（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 B—標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液的平均吸光度值 B0—0(ppb)標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以呋喃西林代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣品的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲呋喃西林樣品所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣品中呋喃西林代謝物實際殘留量。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。樣品的稀釋倍數(shù)：肌肉、肝臟組織、蜂蜜樣品稀釋倍數(shù)：2 十一、檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度試劑盒靈敏度：0.05ppb 檢測限：組織、蜂蜜…………………………………0.1ppb 回收率：水產(chǎn)、肌肉、肝臟、蜂蜜 ………………………… 75±10% 精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10% 十二、注意事項 1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3、每加一種試劑前需將其搖勻。 4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。 6、儲存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。 8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到25min（或更長），但不得超過30min。反之，則減短反應(yīng)時間。 9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。十三、貯藏條件及保存期貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。 1盒96捆，最多可測90個樣本。

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