檢測認(rèn)證人脈交流通訊錄
人柯薩奇病毒A16(CVA16)定性檢測試劑盒(ELISA) 說明書
- 【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:人柯薩奇病毒A16(CVA16)定性檢測試劑盒(ELISA)
英文名稱:Human CVA16 (CVA16) ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
48人份/盒,96人份/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用,定性檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中是否含有人柯薩奇病毒A16。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。在預(yù)包被人柯薩奇病毒A16抗原(固相抗原,貨號:INS1070002C)的微孔酶標(biāo)板中,加入人柯薩奇病毒A16陰陽性性對照(貨號:INS1070002J)和待測樣本,溫育洗滌,再加入另一株HRP標(biāo)記的抗人柯薩奇病毒A16抗體(酶標(biāo)抗體,貨號:INS1070002E),經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結(jié)合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,在終止液(2M 硫酸)作用下,最終轉(zhuǎn)化為黃色,在酶標(biāo)儀上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中人柯薩奇病毒A16的濃度正相關(guān),通過計(jì)算公式判斷樣品陰陽性。
【主要組成成分】
主要成分
組分 數(shù)量 主要成分
陰性對照 0.5ml/管 不含待測物的緩沖液
陽性對照 0.5ml/管 含待測物的緩沖液
包被微孔板 96T 預(yù)包被固相抗原
HRP標(biāo)記抗體 6mL HRP標(biāo)記的檢測抗體
底物液A 6mL 過氧化脲工作液
底物液B 6mL TMB工作液
樣本稀釋液 6mL 緩沖液
終止液 6mL 硫酸稀釋液
20×濃縮洗滌液 30mL 含0.15%Tween20的PBS
說明書 1份 --
自封袋 1個(gè) --
不干膠 2片 --
陰陽性對照已經(jīng)通過測試,結(jié)果表明HBs抗原陰性,HIV1、HIV2和HCV抗體陰性,由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì),本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理,處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、質(zhì)控品(可以從藍(lán)圖生物選擇,貨號:INS1070002Q)
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個(gè)月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,有效期為28天,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細(xì)胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲(chǔ)存72h,或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融,使用時(shí)在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗(yàn)方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前,所有的組分都要至少復(fù)溫2h,確保充分復(fù)溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1體積充分混合,混合后15分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置陰陽性對照孔、樣本孔,陰陽性對照孔各加對照品50μL,樣本孔加樣本50μL。
5、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
6、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動(dòng)洗板機(jī),請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
7、所有孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。
8、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動(dòng)洗板機(jī),請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL,在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測完成后,以陰性對照的OD+0.25,做為閾值,樣本OD值大于閾值,為陽性;樣本OD值低于閾值為陰性。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用,過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,請將樣本適當(dāng)稀釋后,再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測結(jié)果,檢測前,請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣。
2、陰性結(jié)果
陰性對照的OD值不高于0.2。
3、陽性結(jié)果
陽性對照的OD值不低于0.8。
4、特異性
本試劑盒識別天然和重組人柯薩奇病毒A16,與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
5、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,有效期6個(gè)月。
【注意事項(xiàng)】
生物安全
1、檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。
2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應(yīng),避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套,實(shí)驗(yàn)完成后徹底洗手。
技術(shù)提示
1、混合蛋白溶液時(shí),避免起泡。
2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí),每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應(yīng)該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、合適的溫育時(shí)間,和充分的洗滌步驟,是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{(lán)色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍(lán)色底物產(chǎn)物,會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。
6、實(shí)驗(yàn)中,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級別,進(jìn)行廢物和污物的處理,同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。
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