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篤瑪乙酰白藜蘆醇說(shuō)明書(shū)

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品　　牌：
DM

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出廠價(jià)：
1 元/瓶

主要規(guī)格：
20mg

用　　途：
科研

乙酰白藜蘆醇樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。乙酰白藜蘆醇常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。 His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。 GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高，表達(dá)產(chǎn)物純化方便，利于GST抗體制備的特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到。 GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè)，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測(cè)GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測(cè)和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)GFP融合表達(dá)蛋白等。 Myc標(biāo)簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過(guò)偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)但很少用于純化。 HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運(yùn)用。 MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應(yīng)用相對(duì)較少。乙酰白藜蘆醇洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

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楊燕燕

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