檢測認證人脈交流通訊錄
- 藍光/綠光LED凝膠成像儀
技術
核酸的檢測目前仍然主要是使用溴化乙錠這類核酸染色劑及紫外光照射。然而，紫外線對核酸的降解已有很多文獻報道，因此可以認為它本身就是一種核酸破壞劑。此外，紫外線對使用者來說也具有危險性。因此總的來說，目前的這類核酸檢測技術會由于DNA分子的破壞，而導致如測序、克隆等多種下游應用的效率大大降低。無害化的可見光已經被用于檢測核酸，其主要局限性是只能激發綠色染料。以其開發的全新安全核酸染料MIDORIGreen而聞名的NIPPON Genetics EUROPE公司，針對目前的核酸檢測技術開發了一種全新的核酸染料檢測方法，它能夠激發所有商用核酸染料。
紫外燈的危害性
DNA能夠吸收紫外光譜中的光。其結果是形成嘧啶二聚體；單鏈DNA和雙鏈DNA斷裂，DNA與DNA發生鏈間交聯和DNA與蛋白質發生交聯。雖然生物體能夠修復這些DNA損傷并承受上述后果，但瓊脂糖凝膠中的DNA缺乏這些修復機制。此外，與整個生物體相比，凝膠中的DNA量要少得多。下面是對短期紫外線照射引起的DNA降解的研究結果：電泳后，凝膠在紫外線下長達60秒。PCR產物隨后被分離并克隆到一個對照載體中，之前用NdeI和HindIII進行雙酶切，然后被克隆并轉染到大腸桿菌DH5α(BL21)細胞中。結果如下:
在紫外線下的DNA受損嚴重，克隆效率明顯降低。紫外照射60s后，DNA含量比空對照組要少得多。因此，我們確認了紫外線照射引起的DNA降解并且*破壞DNA。
一代技術---藍色LED
2009年，科研界引入了藍光發光二極管（LED）透射器。LED是能將電轉化為光的半導體。其優點是波長，效率*，平均壽命高達50000小時。它們發射出比紫外線波長更長的470nm波長的光。
重復上述實驗，并將DNA在藍色LED燈下相同時間：
正如理論所預期的那樣，后每板CFU的數量沒有任何顯著變化。因此，防止DNA損傷大大提高了克隆效率。
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