檢測認證人脈交流通訊錄
- 生物制藥雜質概述：
在單克隆抗體藥物的純化過程中，以蛋白A(Protein A)為基礎的親合層析是廣泛應用的純化方法之一，單克隆抗體可以有效的在此步驟中得到純化。蛋白A 的最初來源是細菌(Staphylococcus aureus)細胞壁中的一個蛋白質，研究表明蛋白A 可能對人體有潛在的危害，它的生物學作用包括刺激人體多種細胞素(IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4)的釋放。由于在蛋白A 親合層析柱使用過程中會有微量的蛋白A 從層析柱上脫落下來，因此用精確靈敏的方法來確證單克隆抗體藥物中蛋白A 的殘留處于一個較低的和穩定的水平是單克隆抗體藥物的質量標準之一。
蛋白A (Protein A) 酶聯檢測試劑盒是用來定量分析生物藥物中蛋白A雜質的試劑盒。首先，用不同濃度的蛋白A標準蛋白制作一條標準曲線，然后再根據標準曲線來分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。具體方法為：先將蛋白A標準蛋白或者待測樣品適當稀釋后加入已包被好抗蛋白A抗體的96孔平板中。經過1.5小時的保溫，蛋白A與已經固定在平板上的抗體結合形成抗原-抗體復合物。此復合物被隨后加入的生物素標記的抗蛋白A的抗體結合并進一步形成更高級的復合物，反應45分鐘后洗去未結合的物質。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物(Streptavidin-HRP Conjugate)，靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標記的抗體相結合，從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結合的物質，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產生顏色反應，待顏色反應一段時間后，終止反應。用酶標儀在450 nm波長下測定其結果，此結果能間接地反應結合到平板上的蛋白A數量的多少。根據蛋白A標準曲線定量分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。
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