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對應(yīng)法規(guī)：化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007
CNAS認可項目：是

1 范圍本規(guī)范規(guī)定了測定祛痘除螨類化妝品中鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素、氯霉素6 種抗生素和甲硝唑的高效液相色譜法。本規(guī)范適用于祛痘除螨類化妝品中鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素、氯霉素和甲硝唑含量的測定。 2 方法提要鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素、氯霉素和甲硝唑在268nm 處有紫外吸收，可用反相高效液相色譜分離，并根據(jù)保留時間和紫外光譜圖定性，峰面積定量。各組分的檢出限及取1g 樣品時的檢出濃度見表1。表1 各組分的檢出限和檢出濃度物質(zhì)名稱鹽酸美滿霉素甲硝唑二水土霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸金霉素鹽酸多西環(huán)素氯霉素檢出限（ng） 50 50 1 1 1 1 1 定量下限（ng） 150 150 3.3 3.3 3.3 3.3 3.3 檢出濃度（μg/g） 50 50 1 1 1 1 1 最低定量濃度（μg/g） 150 150 3.3 3.3 3.3 3.3 3.3 3 試劑 3.1 甲醇，色譜純。 3.2 乙腈，色譜純。 3.3 草酸，分析純。 3.4 鹽酸（0.1mol/L）：取優(yōu)級純濃鹽酸（ρ20=1.19g/mL）8.3mL 加水至1L。 3.5 混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：分別準(zhǔn)確稱取鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素、氯霉素、甲硝唑各0.1000g，用少許甲醇（3.1）及鹽酸（3.4）溶解，移入100mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，配成各組分質(zhì)量濃度為1.00g/L 的混合標(biāo)準(zhǔn) 溶液。 4 儀器 4.1 高效液相色譜儀，具二極管陣列檢測器，色譜處理機或色譜工作站。 4.2 微量進樣器或自動進樣裝置。 4.3 超聲波清洗器。 5 分析步驟 5.1 樣品預(yù)處理準(zhǔn)確稱取樣品約1g 于10mL 具塞比色管中，加入甲醇（3.1）+鹽酸（3.2）=1+1 的混合溶液至刻度，振搖，超聲提取20min～30min。經(jīng)0.45μm 濾膜過濾，濾液作為待測溶液備用。 253 5.2 色譜參考條件色譜柱：C18 柱，250mm×4.6mm I.D.，5μm；檢測器：二極管陣列檢測器，檢測波長268nm；流動相：0.01mol/L 草酸溶液（磷酸調(diào)節(jié)水溶液的pH至2.0）+甲醇+乙腈=67+11+22（HPLC 分析前，經(jīng)0.45μm 濾膜過濾及真空脫氣）；流量：0.8mL/min；柱溫：室溫。 5.3 校準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確移取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.5）于10mL 具塞比色管中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45μm 濾膜過濾備用。在設(shè)定色譜條件下，分別取10μL 進行分析。根據(jù)標(biāo) 準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度和峰面積繪制校準(zhǔn)曲線。 5.4 樣品測定在設(shè)定的色譜條件下進10μL 樣品溶液（5.1）進行分析，若樣品含量過高，應(yīng)用流動相稀釋后測定。根據(jù)峰面積，從校準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)成分的質(zhì)量濃度。 6 計算 ρ×V ω（抗生素、甲硝唑）＝ m 式中：ω（抗生素、甲硝唑）——化妝品中抗生素、甲硝唑的質(zhì)量分數(shù)，μg/g； ρ——測試溶液中抗生素、甲硝唑的質(zhì)量濃度，mg/L； V——樣品定容體積，mL； m——樣品取樣量，g。 7 色譜圖圖1 抗生素、甲硝唑的色譜圖 1：鹽酸美滿霉素；2：甲硝唑；3：二水土霉素；4：鹽酸四環(huán)素； 5：鹽酸金霉素；6：鹽酸多西環(huán)素；7：氯霉素 254

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