主要功能

傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比，激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r觀察并可形成清晰的三維圖象等優(yōu)點(diǎn)，在對生物樣品的觀察中，激光共聚焦顯微鏡有如下優(yōu)越性：1、對活細(xì)胞和組織或細(xì)胞切片進(jìn)行連續(xù)掃描，可獲得精細(xì)的細(xì)胞骨架、染色體、細(xì)胞器和細(xì)胞膜系統(tǒng)的三維圖像。2、可以得到比普通熒光顯微鏡更高對比度、高解析度圖象、同時具有高靈敏度、杰出樣品保護(hù)。3、多維圖象的獲得，如7維圖象(XYZaλIt): xyt、xzt和xt掃描,時間序列掃描旋轉(zhuǎn)掃描、區(qū)域掃描、光譜掃描、同時方便進(jìn)行圖像處理。4、細(xì)胞內(nèi)離子熒光標(biāo)記，單標(biāo)記或多標(biāo)記，檢測細(xì)胞內(nèi)如PH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率測定及動態(tài)變化。5、熒光標(biāo)記探頭標(biāo)記的活細(xì)胞或切片標(biāo)本的活細(xì)胞生物物質(zhì)，膜標(biāo)記、免疫物質(zhì)、免疫反應(yīng)、受體或配體，核酸等觀察；可以在同一張樣品上進(jìn)行同時多重物質(zhì)標(biāo)記，同時觀察；6、對細(xì)胞檢測無損傷、精確、準(zhǔn)確、可靠和優(yōu)良重復(fù)性；數(shù)據(jù)圖像可及時輸出或長期儲存。

應(yīng)用范圍

1、細(xì)胞生物學(xué)：如：細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、流動性、受體、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)和分布變化、細(xì)胞凋亡機(jī)制；各種細(xì)胞器、結(jié)構(gòu)性蛋白、DNA、RNA、酶和受體分子等細(xì)胞特異性結(jié)構(gòu)的含量、組分及分布進(jìn)行定量分析；DNA、RNA含量、利用特定的抗體對紫外線引起的DNA損傷進(jìn)行觀察和定量；分析正常細(xì)胞和癌細(xì)胞細(xì)胞骨架與核改變之間的關(guān)系；細(xì)胞黏附行為等；2、生物化學(xué)：如：酶、核酸、受體分析、熒光原位雜交、雜色體基因定位等，利用共聚焦技術(shù)可以取代傳統(tǒng)的核酸印跡染交等技術(shù)，進(jìn)行基因的表達(dá)檢測，使基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯等檢測變的更加簡單、準(zhǔn)確。3、藥理學(xué)：如：藥物對細(xì)胞的作用及其動力學(xué)；藥物進(jìn)入細(xì)胞的動態(tài)過程、定位分布及定量4、生理學(xué)、發(fā)育生物學(xué)：如：膜受體、離子通道、離子含量、分布、動態(tài)；動物發(fā)育以及胚胎的形成，骨髓干細(xì)胞的分化行為；細(xì)胞膜電位的測量.熒光漂白恢復(fù)(FRAP)、熒光漂白丟失(FLIP)的測量等。5、遺傳學(xué)和組胚學(xué)：如：細(xì)胞生長、分化、成熟變化、細(xì)胞的三維結(jié)構(gòu)、染色體分析、基因表達(dá)、基因診斷；6、微生物學(xué)：如：細(xì)菌、寄生蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)；7、免疫學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)：如：免疫熒光標(biāo)記(單標(biāo)、雙標(biāo)或三標(biāo))的定位，細(xì)胞膜受體或抗原的分布,微絲、微管的分布、兩種或三種蛋白的共存與共定位、蛋白與細(xì)胞器的共定位；對活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定位及動態(tài)觀察可實(shí)時原位跟蹤特定蛋白在細(xì)胞生長、分裂、分化過程中的時空表達(dá)，熒光能量共轉(zhuǎn)移(FRET)等。

使用方向

保障所內(nèi)科研任務(wù)順利進(jìn)行的前提下，向所內(nèi)、外開放共享。

說明

激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscope LSCM)上世紀(jì)80年代發(fā)展起來，是最精密的細(xì)胞生物學(xué)分析儀器之一。激光共聚焦顯微鏡利用激光作為光源，在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦的原理和裝置，以及通過針孔的選擇和PMT的收集，并帶有一套對其所觀察到的對象進(jìn)行數(shù)字圖像分析處理的系統(tǒng)軟件。與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比，它具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r觀察并可形成清晰的三維圖象等優(yōu)點(diǎn)。激光共聚焦顯微鏡主要有四部分組成：1、顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)。2、掃描裝置。3、激光光源。4、檢測系統(tǒng)。1.1顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)顯微鏡是LSCM的主要組件，它關(guān)系到系統(tǒng)的成象質(zhì)量。顯微鏡光路以無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)可方便地在其中插人光學(xué)選件而不影響成象質(zhì)量和測量精度。物鏡應(yīng)選取大數(shù)值孔徑平場復(fù)消色差物鏡，有利于熒光的采集和成象的清晰。需進(jìn)行物鏡組的轉(zhuǎn)換，濾色片組的選取，載物臺的移動調(diào)節(jié)，焦平面的鎖定等操作1.2掃描裝置LSCM使用的掃描裝置在生物領(lǐng)域一般為鏡掃描。由于轉(zhuǎn)鏡只需偏轉(zhuǎn)很小角度就能涉及很大的掃描范圍，圖象采集速度大大提高，512×512畫面每秒可達(dá)4幀以上，有利于那些壽命短的離子作熒光測定。1.3激光光源LSCM使用的激光光源有單激光和多激光系統(tǒng)。多激光器系統(tǒng)在可見光范圍使用多譜線氬離子激光器，發(fā)射波長為457nm、488nm和514nm的藍(lán)綠光，氦氖綠激光器提供發(fā)射波長為543nm的綠光，氦氖紅激光器發(fā)射波長為633nm的紅光，新的405nm半導(dǎo)體激光器的出現(xiàn)可以提供近紫外譜線。1.4檢測系統(tǒng)LSCM為多通道熒光采集系統(tǒng)，一般有三個熒光通道和一個透射光通道，能升級到四個熒光通道，可對物體進(jìn)行多譜線激光激發(fā)，樣品發(fā)射熒光的探測器為感光靈敏度高的光電倍增管PMT，配有高速12位A/D轉(zhuǎn)換器，可以做光子計數(shù)。PMT前設(shè)置針孔，由計算機(jī)軟件調(diào)節(jié)針孔大小，光路中設(shè)有能自動切換的濾色片組，滿足不同測量的需要,也有通過光柵或棱鏡分光后進(jìn)行光譜掃描功能的設(shè)置。二、激光共聚焦顯微鏡的特點(diǎn)以及在生物領(lǐng)域的應(yīng)用傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比，激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r觀察并可形成清晰的三維圖象等優(yōu)點(diǎn)，在對生物樣品的觀察中，激光共聚焦顯微鏡有如下優(yōu)越性：1、對活細(xì)胞和組織或細(xì)胞切片進(jìn)行連續(xù)掃描，可獲得精細(xì)的細(xì)胞骨架、染色體、細(xì)胞器和細(xì)胞膜系統(tǒng)的三維圖像。2、可以得到比普通熒光顯微鏡更高對比度、高解析度圖象、同時具有高靈敏度、杰出樣品保護(hù)。3、多維圖象的獲得，如7維圖象(XYZaλIt): xyt、xzt和xt掃描,時間序列掃描旋轉(zhuǎn)掃描、區(qū)域掃描、光譜掃描、同時方便進(jìn)行圖像處理。4、細(xì)胞內(nèi)離子熒光標(biāo)記，單標(biāo)記或多標(biāo)記，檢測細(xì)胞內(nèi)如PH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率測定及動態(tài)變化。5、熒光標(biāo)記探頭標(biāo)記的活細(xì)胞或切片標(biāo)本的活細(xì)胞生物物質(zhì)，膜標(biāo)記、免疫物質(zhì)、免疫反應(yīng)、受體或配體，核酸等觀察；可以在同一張樣品上進(jìn)行同時多重物質(zhì)標(biāo)記，同時觀察；6、對細(xì)胞檢測無損傷、精確、準(zhǔn)確、可靠和優(yōu)良重復(fù)性；數(shù)據(jù)圖像可及時輸出或長期儲存。